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產(chǎn)品展示
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彩色無內毒素質粒大提試劑盒 核酸提取

  • 型   號:31115
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-22
  • 廠家性質:經(jīng)銷商

本試劑盒用于無內毒素質粒 DNA 的大量制備,柱上去除內毒素,操作簡單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,質??蓮木w中釋放出來,并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質,最后得到高純度的無內毒素質粒 DNA,所得質??芍苯佑糜诿盖?、轉化、PCR、測序、細胞轉染等分子生物學實驗。
彩色無內毒素質粒大提試劑盒 核酸提取

EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色無內毒素質粒大提試劑盒


彩色無內毒素質粒大提試劑盒 核酸提取

目錄號:31115-10

產(chǎn)品內容

產(chǎn)品組成

保存

10 preps

Buffer BL

室溫

25 ml

Solution I

室溫

100 ml

Solution II

室溫

100 ml

Solution N3

室溫

100 ml

ToxinOut Buffer

室溫

60 ml

Buffer WB2concentrate

室溫

60 ml

Buffer EB

室溫

30 ml

RNase A (10 mg/ml)

-20

1 ml

MaxiSpin Columns with Collection Tubes 50 ml

室溫

10

Collection Tubes 50 ml

室溫

10

保存條件:

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下,可保存 12 個月。

RNase  A,可常溫運輸,-20℃保存。

產(chǎn)品簡介:

本試劑盒用于無內毒素質粒 DNA 的大量制備,柱上去除內毒素,操作簡單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,質??蓮木w中釋放出來,并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質,最后得到高純度的無內毒素質粒 DNA,所得質??芍苯佑糜诿盖?、轉化、PCR、測序、細胞轉染等分子生物學實驗。

小質粒(<10kb,拷貝數(shù)高,100ml 菌液通常能提到 500-1500ug 質粒;大質粒(>10kb,拷貝數(shù)低,200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質粒。

產(chǎn)品特點:

1. du特工藝配方清除內毒素,內毒素含量極低(< 1 EU/ug DNA,細胞轉染效果ji佳。

2. 得率高: 150 300 ml 菌液可提出多達 5002000 ug 的純凈質粒;

重要提示:

一、使用前檢查 Solution II  Solution N3 是否出現(xiàn)沉淀,如有沉淀 37℃加熱溶解后再用。

二、shou次使用前,請先在 Buffer WB2 中加入無水乙醇(詳見瓶身標簽,混勻,并做好標記。

三、shou次使用請先將 RNase A 全部加到 Solution I 中,混勻,每次使用后置于 2 ~ 8℃保存。

操作步驟:

1. 柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入 2.5 ml Buffer BL,10,000 rpm  2 min,棄收集管中濾液,將吸附柱重新放回收集管中。

2.  100 ~ 150 ml(最多 200 ml)過夜培養(yǎng)的菌液,室溫 10,000 rpm 離心 2 min,棄上清,收集菌體。

注意: 如果菌液濃度高,收集 100ml 的菌體即可,菌液濃度低,收集 150-200ml 菌液。

3. 加入 10 ml Solution I,重懸菌體沉淀,渦旋震蕩至che底懸浮,呈現(xiàn)出均勻渾濁的棕紅色。

(注意:如有未che底懸浮的菌塊會影響裂解,導致提取的質粒濃度及純度降低

4. 加入 10 ml Solution II,顛倒混勻使菌體wan全裂解,直到溶液變清亮、粘稠的紫紅色。

(注意:不可 Votex 劇烈震蕩,以免造成基因組 DNA 片段的污染,所用時間不要超過 5 min,以免質粒受到破壞,如未wan全變得清亮,可能是菌體太多,可增加 Solution II 的用量,在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應增加

5. 加入 10 ml Solution N3,立即溫和顛倒混勻,可見紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生,繼續(xù)混勻直

到wan全變?yōu)辄S色,靜置 2 min,然后室溫 10,000 rpm 離心 10 min,小心取上清至新管。

(注意:離心后在最上層可能會出現(xiàn)一層漂浮膜,注意不要倒入吸附柱

6. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇,上下顛倒混勻。分兩次(每次不超過 10 ml)轉入吸附柱中(吸附柱放入收集管中,10,000 rpm 離心 1 min,質粒被吸附在膜上,棄濾液,直到所有混合溶液通過此吸附柱。

7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer,室溫 10,000 rpm 離心 1 min,棄濾液。

8. 加入 10 ml Buffer WB2,室溫 10,000 rpm 離心 1 min,棄濾液。

(注意:Buffer WB2 為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā)

9. 加入 5 ml Buffer WB2,室溫 10,000 rpm 離心 1 min,棄濾液。

10. 將吸附柱放進收集管,室溫 10,000 rpm 離心 5 min,甩干膜上殘留乙醇。

11. 將吸附柱置于一個新的 50 ml 離心管(自備)中,打開管蓋,室溫晾干 5 min,以免殘留乙醇影響下游應用。

12. 加入 1 ~ 2 ml 的洗脫液Buffer EB,室溫放置 2 min,12,000 rpm 離心 2 min,離心管底溶液即質粒 DNA。

注意:事先在 65~70℃水浴中預熱洗脫緩沖液 EB,可增加洗脫效率;

如果需要較多量質粒,可將得到的質粒溶液重新加入吸附柱中,重復收集 3 次,可獲得最大洗脫率;如需使用去離子水洗脫,可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間。


彩色無內毒素質粒大提試劑盒 核酸提取

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